При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. Урогенитальные инфекции у женщин, количественное определение ДНК, ПЦР. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — это метод молекулярно-генетической диагностики, позволяющий обнаружить в организме человека различные инфекционные заболевания.
ПЦР на инфекции
для выявления данных инфекций рекомендуется использовать метод иммуноферментного анализа. Полимеразная цепная реакция (ПЦР) — высокоточный метод диагностики заболеваний, основанный на копировании ДНК или РНК патогена в пробе. ПЦР (полимеразная цепная реакция). Этот метод исследования на инфекции, считающийся «золотым стандартом» в современной диагностике, обладает высокой точностью. ПЦР-тест направлен на определение возбудителя заболевания, а не на реакцию на его проникновение со стороны организма. Какие половые инфекции выявляет ПЦР анализ. Сдать анализы методом ПЦР и провести полную диагностику и лечение инфекционных заболеваний Вы можете в медицинском центре «Евромедпрестиж».
Какие анализы сдать на половые инфекции
Кроме того есть ограничения по жизнеспособности самих исследуемых патогенов. Наиболее достоверные результаты обследования на трихомонаду могут быть получены при сочетании как минимум двух методов: микроскопия мазка - культуральный метод или микроскопия мазка - ПЦР. Иммунофлуоресцентный анализ также используется для диагностики трихомониаза, однако отрицательный результат при использовании этого метода не является абсолютным, необходимо проводить дополнительные исследования. При бессимптомном течении трихомониаза часто применяется ПЦР - диагностика. Исследование гуморального ответа при трихомониазе, как и при гонорее, в диагностических целях не регламентировано. Что касается диагностики хламидиоза, то здесь, по-прежнему, «золотым стандартом» считается культуральный метод. По мнению ведущих российских специалистов Института Пастера Санкт-Петербург , занимающихся изучением проблем диагностики хламидиоза, для выявления этой ИППП необходимо применение сразу трех методов: прямая иммунофлуоресценция исследование препарата под микроскопом с использованием специфических антител к антигенам , культуральный метод и ПЦР. Используется и еще один метод диагностики - иммуноферментный анализ на наличие в крови специфических антител. При этом, в отличие от всех других ИППП, только для хламидий имеет смысл проводить иммуноферментный анализ на наличие в крови специфических антител, поскольку во всех остальных случаях генерализованный иммунный ответ на инфекцию возникает чрезвычайно редко, следовательно, невозможно определить антитела к конкретному патогену, ведь они просто не образуются.
При хламидиозе вероятность появления антител выше, поскольку ярче выражен иммунный ответ организма на появление этого патогена, но, тем не менее, и здесь далеко не во всех случаях у инфицированного пациента наблюдается присутствие антител в крови. К примеру, когда проводились исследований в парах, оказалось, что даже если методом ПЦР хламидии были обнаружены и у мужчины и у женщины, в большинстве случаев антитела в крови присутствовали у женщины, а у мужчины - нет. Это связано с тем, что у мужчин данная инфекция гораздо реже вызывает генерализованный ответ. Как и для диагностики трихомониаза, для выявления хламидии необходимо, как минимум, сочетание двух методов. Наиболее оптимальными сочетаниями являются микроскопия мазка с иммунофлуоресцентным мечением - ПЦР и культуральный метод - ПЦР. ПЦР анализ обладает высокой диагностической чувствительностью. И сама по себе процедура выявления патогенов таким способом является универсальной: в одном ПЦР - амплификаторе можно по одному протоколу проводить одновременный анализ нескольких патогенов. То есть один образец биоматериала пациента можно проанализировать сразу на несколько инфекций.
Считается, что положительный результат ПЦР анализа - это прямое указание на наличие возбудителя инфекции, потому что сам по себе метод ПЦР является очень специфичным. Но и здесь могут быть всевозможные варианты, например, нарушение правил пробоподготовки выделение ДНК из биоматериала , из-за чего может быть получен ложноположительный результат или за счет контаминации продуктами амплификации.
С большой точностью положительный результат указывает на наличие инфекции в данный момент времени. Существуют ситуации, когда ПЦР оказывается положительной, а об активной инфекции говорить нельзя — это так называемое «здоровое носительство» без клинических симптомов болезни, которое не требует лечения, но требует динамического наблюдения у врача. Наблюдается чаще при ряде вирусных инфекций ВПЧ, ЦМВИ, ВЭБ-инфекция, герпетическая инфекция и другие в таких материалах как слюна, соскоб цервикального канала, уретры, то есть из местного очага. Однако нельзя забывать, что передача инфекции от носителей здоровым людям возможна, как и возможен переход в хроническую форму болезни с активацией процесса. Если же ПЦР положительна в крови, то это уже не носительство и требует специфического лечения. Количественный результат ПЦР оценивается только врачом индивидуально для той или иной инфекции отдельно и не имеет общих градаций. На основании количественного результата ПЦР врач может установить степень активности инфекции и выставить стадию болезни, что безусловно отразится на курсе и дозах назначенных лекарственных средств.
Один из последних волнующих вопросов: насколько точна ПЦР-диагностика? Для ПЦР анализа существует 3 определения: 1. Точность с высокой долей вероятности возможно выявление или отсутствие инфекции. Специфичность точность выявления конкретной инфекции. Чувствительность даже при низком содержании генетического материала возбудителей в исследуемом образце инфекция будет обнаружена. Полимеразно-цепная реакция практически не выдает ложноположительных результатов то есть не бывает положительных проб там, где инфекция отсутствует.
Случается, что ответы разных исследований противоречат друг другу. ПЦР является реакцией проверки, то есть именно по её положительному результату судят о наличии возбудителя. Например, если ПЦР положительна, а мазок на флору отрицательный. Мы считаем, что в последнем случае в материал просто не попало нужного количества микроорганизмов. Или они не окрасились по разным причинам. Если ПЦР положительна, а серологические пробы отрицательны, то организм человека не вырабатывает иммунного ответа на возбудителя. Наблюдается состояние иммуносупрессии, что бывает: при ВИЧ при приёме специальных лекарственных препаратов после трансплантации при лечении аутоиммунных заболеваний в период выздоровления после тяжёлой болезни при истощении или тяжелой хронической усталости Если ПЦР отрицательна, а серологические пробы положительны, то нужно смотреть на фракцию иммуноглобулинов. IgM характерен для острой фазы течения заболевания при первичном заражении. В такой ситуации врач может повторить забор материала. Или ориентироваться по точному, но длительно выполняемому культуральному методу посев культуры возбудителя на питательные среды. Высокий титр Ig A или IgG могут свидетельствовать о хронической инфекции в стадии обострения. А их низкие титры — просто о том, что пациент перенёс данное заболевание. Именно поэтому серологические пробы не используют для контроля эффективности лечения. В частности, проводить ПЦР нужно после определенного промежутка. Цена анализа зависит от материала, использованного для ПЦР, и колеблется от 350 до 1200 рублей.
Для определения возбудителя разных инфекций забор материала может отличаться. У женщин для определения заболеваний, которые передаются половым путем, анализ берется из шейки матки, мочеиспускательного канала, а также исследуются выделения из влагалища и моча. У мужчин для определения ЗППП берется мазок из мочеиспускательного канала, выделения, если таковые присутствуют, и моча. Когда врач назначает ПЦР анализ, многие пациенты отказываются от него, аргументируя тем, что он достаточно дорогой, а точность результата неизвестна. Это большое заблуждение. Рассмотрим, каковы же минусы и плюсы данного вида диагностики. Плюсы исследования: Универсален. Позволяет определить не только наличие возбудителя, его тип, а также количественное соотношение данного микроорганизма. Это значит, что в процессе исследования определяется последовательность нуклеотидов, характерная для отдельно взятого микроорганизма.
Полимеразная цепная реакция (ПЦР) диагностика: что это такое
Если есть подозрение на конкретное заболевание (инфекцию, передающуюся половым путем), врач может назначить анализ, наиболее показательный для выявления именно данной инфекции. При проведении ПЦР-анализа ведется поиск такого фрагмента ДНК инфекции, который специфичен только для данного микроорганизма. У женщин анализ крови на ВИЧ с ПЦР, а также поиск других возбудителей с помощью этой методики очень информативен, дает вероятность точного результата в 90-95% случаев. для выявления данных инфекций рекомендуется использовать метод иммуноферментного анализа. Полимеразная цепная реакция, или ПЦР анализ, является методом диагностирования инфекционных возбудителей в организме.
Анализ ПЦР на инфекции у женщин: современная диагностика
Подтверждение этому - Нобелевская премия в области химии, которой был удостоен К. Муллис в 1993 году. Помимо медицины метод нашёл применение в генетике, криминалистике, археологии. Универсальность метода позволяет применять его для диагностики большинства патологий вирусной, бактериальной, грибковой природы, а также вызываемых гельминтами и простейшими.
Например, метод ПЦР активно используется для выявления таких болезней инфекционной природы, как ВИЧ, гепатиты всех видов, уреаплазмоз, хламидиоз, микоплазмоз, кандидоз, мононуклеоз, трихомониаз, герпетические инфекции, сальмонеллёз, туберкулёз и многие другие.
Бактериологические исследования — посев выделений из влагалища и уретры. ПЦР-диагностика — один из самых точных методов исследования.
Анализы крови на выявление ВИЧ, гепатитов, сифилиса и других заболеваний. Эксперты рекомендуют часто проходить анализы на половые инфекции. Какие анализы сдавать на ЗППП?
Определить какие анализы сдавать на ЗППП просто — женщины должны обратиться к гинекологу, а мужчины к урологу или андрологу, которые произведут осмотр, дадут направления на все необходимые анализы, мазки на половые инфекции, объяснят, как берут анализ на ИППП и выдадут рекомендации по дальнейшему лечению. В клинике «РашЭл» Вы можете сдать любое исследование и получить точную информацию о состоянии Вашего здоровья. После обследования врач назначит Вам соответствующую терапию.
Добавление специфичеких ферментов может увеличить выход ПЦР-реакции. Ход реакции Обычно при проведении ПЦР выполняется 20 - 35 циклов, каждый из которых состоит из трех стадий. Эта стадия называется денатурацией — разрушаются водородные связи между двумя цепями. Иногда перед первым циклом проводят предварительный прогрев реакционной смеси в течение 2 - 5 минут для полной денатурации матрицы и праймеров. Когда цепи разошлись, температуру понижают, чтобы праймеры могли связаться с одноцепочечной матрицей. Эта стадия называется отжигом. Время стадии — 0,5 - 2 минут. ДНК-полимераза реплицирует матричную цепь, используя праймер в качестве затравки. Это — стадия элонгации. Температура элонгации зависит от полимеразы.
Время элонгации зависит как от типа ДНК-полимеразы, так и от длины амплифицируемого фрагмента. Обычно время элонгации принимают равным одной минуте на каждую тысячу пар оснований. После окончания всех циклов часто проводят дополнительную стадию финальной элонгации, чтобы достроить все одноцепочечные фрагменты. Эта стадия длится 10 - 15 мин. Подготовка материала к исследованию и транспорт его в лабораторию Для успешного проведения анализа важно правильно собрать материал у пациента и правильно провести его подготовку. Для взятия крови в лаборатории ИНВИТРО в настоящее время применяются вакуумные системы, которые с одной стороны минимально травмируют пациента, а с другой - позволяют произвести взятие материала таким образом, что он не контактирует ни с персоналом, ни с окружающей средой. Это позволяет избежать контаминации загрязнения материала и обеспечивает объективность анализа ПЦР.
Указанный срок не включает день взятия биоматериала Подготовка к исследованию: Ц. К До применения системного и месного курса антибактериальной, противогрибковой терапии или не менее чем через 2 недели после ее завершения. У женщин материал берется перед менструацией или через 1-2 дня после ее окончания. После тщательного туалета наружных половых органов, промежность и область заднего прохода теплой кипяченной водой без использования мыла и других антибактериальных средств, высушить стерильной марлевой салфеткой.
Анализы на ИППП: как подготовиться, виды анализов, расшифровка результатов
ПЦР — это метод лабораторной диагностики, направленный на выявление возбудителей инфекционных заболеваний. Для правильного анализа ПЦР диагностики скрытых инфекций нужно придерживаться следующих правил. Анализ ПЦР на ИППП – исследование с помощью полимеразной цепной реакции. Комплекс анализов для определения ДНК 12 возбудителей половых инфекций методом ПЦР у женщин: цитомегаловируса; генитального герпеса; вирусов папилломы человека типов 16, 18; урогенитального хламидиоза; урогенитального микоплазмоза); урогенитального уреаплазмоза. Но генетические анализы нужны не так уж часто, поэтому в статье мы будем говорить про ПЦР-анализы на инфекции.
[606] Комплексное исследование на основные инфекции урогенитального тракта
Иногда необходимо пройти обследование вместе с партнёром, чтобы своевременно выявить заболевания, передаваемые половым путем и пройти адекватное лечение. Ведь чем раньше установлен верный диагноз, тем быстрее и легче он поддаётся терапии. Какие анализы нужно сдавать при подозрении на развитие заболеваний, полученных во время незащищённого полового контакта? Иногда, чтобы провериться, женщинам достаточно посетить участкового гинеколога, а мужчинам — уролога либо андролога. Обычные анализы, которые берутся или назначаются при первичном посещении этих специалистов, — кровь, моча, мазки. Это стандартное исследование включает в себя экспертизу на самые распространённые недуги и делается бесплатно по полису ОМС. Всего же способов определить наличие половой инфекции несколько. Различаются они по тому, какой биоматериал забирается на экспертизу. Есть лабораторная диагностика ИППП по крови, мазку из влагалища, уретры, мочевого канала, соку простаты.
Анализ крови на ИППП покажет развитие в организме уреаплозмоза, ВИЧ-инфекции, гепатитов, хламидиоза, сифилиса, микоплазмоза, гонореи и др. Эти же инфекции позволяет выявить экспертиза мочи. Мазок покажет наличие у пациента диагнозов, описанных выше, а ещё кандидоза и других недугов этого плана. Изменения бактериального состава сока простаты провоцируются воспалительными процессами, вызванными половыми инфекциями. Также различаются экспертизы по способу проведения и выявления инфекций. Это выявление четырёх самых распространённых диагнозов способом полимеразной цепной реакции потому так и называется анализ — аббревиатурой метода исследования. Его особенности заключаются в том, что мазок у женщин забирается с шейки матки, а у мужчин из уретры. Этот анализ считается наилучшей диагностикой, так как способен выявить 12 известных диагнозов, передающихся через незащищённый половой контакт.
А вот флуоресцентная диагностика способна «рассказать» не только о том, какие заболевания властвуют в организме пациента сейчас, а также о том, какие заболевание половой сферы человек перенёс, и как давно это было. Какие именно практические методы будут применять при диагностике, решит доктор исходя из оценки внешних клинических проявлений заболеваний. Но зачастую требуется комплексный анализ на выявление половых инфекций. Медики считают его результаты самыми достоверными и практически исключающими диагностическую ошибку. Анализы крови и мочи Анализы крови и мочи — это те исследования, на которые отправляют пациента в первую очередь при любом обращении в медучреждение. Эти биоматериалы, даже если их исследуют не на инфекцию, в любом случае покажут, если в организме идёт не так.
Чаще всего анализы на инфекции назначает гинеколог или уролог. Метод полимеразной цепной реакции отличается Метод полимеразной цепной реакции отличается высокой чувствительностью и специфичностью. Достаточно совсем немного исследуемого материала и, соответственно, ДНК или РНК бактерий и вирусов, чтобы выявить наличие или отсутствие тех или иных возбудителей. Более того, с помощью метода ПЦР можно определить тип конкретного возбудителя. Существует перечень правил, которые следует соблюдать перед анализом ПЦР. Результат может быть: положительным выявлены те или иные возбудители заболеваний отрицательным возбудители заболеваний не выявлены в исследуемом материале Результаты анализов непременно должен оценить наблюдающий врач, и при необходимости назначить лечение.
РТ-ПЦР обладает значительными преимуществами по сравнению с другими методами идентификации ИППП, показывая более высокую чувствительность и специфичность. Несмотря на то что при использовании РТ-ПЦР возможны ложноположительные и ложноотрицательные результаты, ее точность значительно превосходит точность бактериологического посева и других методов. Следует помнить об ограничениях метода РТ-ПЦР: в реакции определяется ДНК как живых, так и разрушенных микроорганизмов, по этой причине метод РТ-ПЦР не используется для контроля лечения ЗППП; результат исследования будет оставаться положительным еще в течение некоторого времени, даже если лечение было эффективно; обнаружение таких возбудителей, как T.
Этот процесс реализуется в лаборатории с использованием особых ферментов. Во время процедуры копируется лишь участок, соответствующий заданным условиям если он присутствует в изучаемом образце. В зависимости от конкретной ситуации для анализа берут кровь, мочу, слюну, отделяемое из половых органов. Затем к образцам добавляют особые ферменты. Копирование представляет собой многоэтапный процесс, протекающий по типу цепной реакции. В результате возможно появление сотен или даже тысяч копий. На следующем этапе диагностики результаты анализируются и сопоставляются с базой данных возбудителей инфекций. Методика ПЦР не просто дает возможность определить вид патогенного организма, но и позволяет сделать выводы о количестве возбудителей инфекции в человеческом организме. Сегодня применение подобных технологий открывает широкие возможности при исследовании мутаций, сращивания участков ДНК. В современной медицине метод начал применяться для определения отцовства, выявления новых генов и многого другого. Благодаря своей универсальности метод ПЦР нашел широкое применение в урологии, гинекологии, пульмонологии, онкологии, гематологии, фтизиатрии, практике инфекциониста и других областях медицины. Материал для анализа ПЦР Для ПЦР диагностики применяются различные биологические среды и жидкости, взятые из организма человека: мокрота, слизь, слюна, моча, кровь, соскоб эпителиальных клеток, ткани плаценты, плевральная жидкость, околоплодная жидкость, сок простаты и др. Для этого выполняют мазок или соскоб из уретры или шейки матки. Также для исследования используют мочу.